反相色谱柱是一种用于分离分析各种物质的高效液相色谱分离柱,由固定床部分和填充物两部分组成。固定床部分由多孔性骨架材料制成,而填充物则包括填料及助剂。常用的填料有硅胶类填料、氧化铝类填料、碳酸钙类填料等,其中硅胶类填料因其良好的性能和稳定性而被广泛应用。
反相色谱柱的固定相通常是非极性的,而流动相则是极性的。这种柱子对于分离极性较小或非极性的化合物具有出色的能力。其工作原理基于溶质在固定相和流动相之间的分配差异,即溶质在流动相和固定相之间不断分配,由于固定相和流动相之间的吸附或溶解能力不同,溶质在两相间的分配系数不同,随流动相移动的速度也不同,因而得以分离。
在使用反相色谱柱时,需要注意以下几点:
新柱应先使用适量的甲醇或乙腈冲洗色谱柱,以确保其性能稳定。
大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2~7.5,使用过程中应尽量避免超过该范围。
避免流动相组成及极性的剧烈变化,以免影响分离效果。
流动相使用前必须经脱气和过滤处理,以防止杂质对色谱柱的损害。
如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完哔后冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中。
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